Quy Trình Tìm Giun Đũa Chó Bằng Phương Pháp Elisa

Hiện nay việc chẩn đoán bệnh ký sinh trùng gồm có nhiều chiêu thức giúp phát hiện nhiều loại ký sinh trùng đang “ ký sinh ” trên khung hình làm hại sức khỏe thể chất để từ đó đưa ra cách vô hiệu chúng. Tùy vào diễn biến cũng như triệu chứng của bệnh nhân, bác sĩ sẽ chỉ định 1 số ít giải pháp chẩn đoán so với từng bệnh nhân. Hầu hết tổng thể những bệnh viện và phòng khám lúc bấy giờ điều sử dụng kỹ thuật Elisa .
Kỹ thuật Elisa phát hiện hầu hết những loại ký sinh trùng xâm nhập vào khung hình người trải qua phân phối miễn dịch của khung hình so với loại ký sinh trùng đó. Tuy nhiên tùy theo mỗi loại ký sinh trùng mà độ đặc hiệu của kháng thể phân phối với những căn nguyên đó. Một số kít Elisa phát hiện ký sinh trùng như giun đũa chó, … có độ đúng chuẩn rất cao, độ đặc hiệu đạt 93.3 % .

Sau đây tất cả chúng ta tìm hiểu và khám phá về kỹ thuật Elisa tìm giun đũa chó

Phương pháp xét nghiệm tìm giun đũa chó là miễn dịch hấp thụ liên kết enzyme. Kỹ thuật xét nghiệm phức hợp Sandwich. Toxocara Elisa Kit là xét nghiệm miễn dịch hấp thụ liên kết enzyme (Elisa) dùng để phát hiện định tính kháng thể IgG kháng Toxocara trong mẫu huyết thanh người.

Nguyên tắc xét nghiệm

Vi giếng được phủ kháng nguyên ngoại tiết của ấu trùng Toxocara. Trong bước ủ tiên phong với huyết thanh của bệnh nhân, nếu có bất kể kháng bộc lộ, chúng sẽ link với những giếng phủ kháng nguyên trong quy trình ủ tiên phong. Tiếp theo, những giếng phải được rửa bỏ những phần còn lại cảu mẫu, và thêm vào là enzyme phối hợp. Trong lần ủ thứ hai, enzyme phối hợp sẽ link với bất kể kháng thể xuất hiện. Sau khi rửa lần 2, chất tạo màu ( tetramethylbenzidine hoặc TMB ) được thêm vào. Với sự hiện hữu của enzyme phối hợp, peroxidase xúc tác sử dụng peroxide để biến chất tạo màu thành màu xanh. Màu xanh chuyển sang màu vàng sau khi bổ dung dịch dừng phản ứng STOP. Kết quả được đọc bằng mắt hoặc sử dụng máy đọc Elisa .

Chuẩn bị

Trước khi sử dụng, ta mang toàn bộ thuốc thử và mẫu để tại nhiệt độ phòng ( 15-25 oC ) .
Dịch rửa đậm đặc ( 20X ) hoàn toàn có thể kết tủa khi dữ gìn và bảo vệ trong tủ lạnh, nhưng sẽ trở thành dung dịch khi đưa về nhiệt độ phòng và trộn. Đảm bảo rằng dịch rửa đậm đặc ( 20X ) là trọn vẹn thành dung dịch trước khi pha loãng thành nồng độ hoạt động giải trí .

Quy trình xét nghiệm

Lưu ý :

Chắc rằng mẫu và thuốc thử phải để tại nhiệt độ phòng ( 15-25 oC ) .
Khi chạy xét nghiệm, nỗ lực tránh tạo bọt trong giếng. Bọt hoàn toàn có thể ảnh hưởng tác động đặc tính kỹ thuật và việc đọc hiệu quả cuối. Đập giếng ngược lên khăn thấm sau mỗi bước để giúp giảm thiểu việc tạo bọt trong giếng .
Chứng âm và dương được phân phối đã pha loãng trước. Không pha loãng thêm .

Các bước tiến hành

Bẻ ra số giếng thiết yếu ( hai cho đối chứng cộng với số lượng mẫu ) và đặt trong khung giữ thanh vi giếng .
Pha loãng huyết thanh bệnh nhân tỷ suất 1 : 64 với đệm pha loãng .
Thêm 100 µl chứng âm vào giếng # 1,100 µl chứng dương vào giếng # 2 và 100 µl mẫu xét nghiệm đã pha loãng vào những giếng còn lại .
Ủ ở nhiệt độ phòng trong 10 phút, sau đó rửa 5 lần. Sau lần rửa cuối, Đập giếng lên khăn giấy để vô hiệu nước còn sót lại .
Thêm 100 µl Enzyme Liên hợp vào mỗi giếng .
Ủ ở nhiệt độ phòng trong 5 phút, sau đó rửa 5 lần. Sau lần rửa cuối, Đập giếng lên khăn giấy để vô hiệu nước còn sót lại .
Thêm 100 µl chất bắt màu TMB vào mỗi giếng .
Ủ ở nhiệt độ phòng xét nghiệm trong 5 phút .
Thêm 100 µl dung dịch dừng phản ứng STOP vào mỗi vi giếng. Trộn bằng cách gõ nhẹ khung giữ bằng ngón tay khoảng chừng 15 giây .
Đọc hiệu quả trong vòng một giờ sau khi thêm dung dịch dừng phản ứng .

Quy trình rửa cho máy rửa tự động hóa và bán tự động hóa

Thực hiện rửa ( 5 ) lần trên một bước thay vì ba lần .
Thiết lập máy để “ ngâm ” một phút giữa mỗi bước rửa .
Sau mỗi bước rửa, đập giếng lên khăn thấm .

Đọc hiệu quả

Máy đọc Elisa : đọc mức Zero với không khí. Thiết lập đọc bước sóng kép tại 450 / 620 – 650 nm .

Giải thích hiệu quả – máy đọc Elisa

Đọc Elisa mức Zero với không khí. Đọc tất cả các giếng tại 450/650 – 620 nm.

Dương tính : hiệu quả đọc độ hấp thụ cao hơn 0,3 đơn vị chức năng OD
Âm tính : hiệu quả đọc độ hấp thụ thấp hơn 0,3 đơn vị chức năng OD .

Giải thích tác dụng – đọc bằng mắt

So sánh tác dụng với đối chứng, tác dụng được cho là dương thế nếu sự tạo màu rõ ràng và có ý nghĩa .

Quản lý chất lượng

Sử dụng thuốc chứng được cho phép xác nhận độ không thay đổi của bộ xét nghiệm. Các bộ xét nghiệm không nên được sử dụng nếu bất kể thuốc chứng nào vượt ra khỏi khoanh vùng phạm vi. Giá trị dự kiến cho những thuốc chứng là :
Chứng âm : 0,0 đến 0,3 đơn vị chức năng OD .
Chứng dương : 0,5 đơn vị chức năng OD trở lên .
Chẩn đoán nhiễm Toxocara không nên được thực thi chỉ dựa trên tác dụng của một xét nghiệm ELISA Toxocara, mà phải tích hợp với những tín hiệu lâm sàng và triệu chứng khác và những phát hiện trong phòng thí nghiệm khác .
Các yếu tố dịch tễ học, lâm sàng, vùng đặc hữu, và hiệu quả xét nghiệm khác cần được xem xét khi thực thi một chẩn đoán .

Bảo quản mẫu

Các chất phản ứng, thanh vi giếng và những thành phần đóng chai dữ gìn và bảo vệ tại 2 – 8 ºC .
Bình tia chứa đệm rửa pha loãng hoàn toàn có thể được tàng trữ ở nhiệt độ phòng .
Liên hệ xét nghiệm và điều trị ký sinh trùng giun sán tại Phòng khám bệnh giun sán, 76 Trần Tuấn Khải, phường 5, Q. 5. Là phòng khám Chuyên khoa Nội Ký sinh trùng uy tín tại TP. HCM. Giờ mở của từ 7 giờ sáng đến 5 giờ chiều, hoạt động giải trí từ thứ 2 đến thứ 7, nghỉ ngày CN. Phòng khám do những bác sĩ Chuyên khoa Ký sinh trùng giàu kinh nghiệm tay nghề xây dựng, trực tiếp khám và điều trị bệnh giun sán, bảo vệ mọi quyền lợi và nghĩa vụ cho người bệnh. / .

Bác sĩ. Lê Giang

PHÒNG KHÁM KÝ SINH TRÙNG

76 TRẦN TUẤN KHẢI, TP.HCM

TRỊ MẨN NGỨA DA DO GIUN SÁN

 ĐC: 76 Trần Tuấn Khải, P.5, Q.5, TP. HCM

Bác sĩ của bạn: 0877688286 

Làm việc từ thứ 2 – 7, Nghỉ ngày CN

Source: https://laodongdongnai.vn
Category: Chia Sẻ Kiến Thức