Sự khác biệt giữa RT PCR và QPCR | So sánh sự khác biệt giữa các thuật ngữ tương tự – Khoa HọC – 2022

Sự khác biệt giữa RT PCR và QPCR – Khoa HọC

Sự khác biệt chính – RT PCR so với QPCR
 

Phản ứng chuỗi polymerase là một kỹ thuật được sử dụng để khuếch đại một vùng cụ thể của DNA trong ống nghiệm. Do Kary Mullis phát minh ra kỹ thuật này vào năm 1983, các nhà khoa học có thể tạo ra hàng nghìn đến hàng triệu bản sao của các đoạn DNA cụ thể cho mục đích nghiên cứu. Hiện nay nó đã trở thành một kỹ thuật phổ biến và được thực hiện thường xuyên trong các phòng thí nghiệm lâm sàng và nghiên cứu cho nhiều ứng dụng khác nhau. Có nhiều biến thể của kỹ thuật PCR truyền thống như RT PCR, PCR lồng nhau, PCR ghép kênh, Q PCR, RT – QPCR, vv RT PCR và Q PCR là hai biến thể quan trọng của PCR. Sự khác biệt chính giữa RT PCR và Q PCR là RT PCR được sử dụng để phát hiện biểu hiện gen thông qua việc tạo DNA bổ sung (cDNA) phiên mã từ RNA trong khi Q PCR được sử dụng để đo định lượng các sản phẩm PCR thời gian thực bằng cách sử dụng thuốc nhuộm huỳnh quang.

NỘI DUNG
1. Tổng quan và sự khác biệt chính
2. RT PCR là gì
3. QPCR là gì
4. So sánh song song – RT PCR và QPCR
5. Tóm tắt

RT PCR là gì?

Phản ứng chuỗi polymerase phiên mã ngược ( RT PCR ) là một biến thể của PCR được sử dụng để phát hiện bộc lộ RNA. Đây là một chiêu thức rất quan trọng để phát hiện biểu lộ mRNA trong những mô. RT PCR được sử dụng khi nguyên vật liệu khởi đầu của mẫu là RNA. Trong RT PCR, mRNA của khuôn mẫu lần tiên phong được quy đổi thành DNA bổ trợ. Bước này được xúc tác bởi enzym phiên mã ngược và quy trình này được gọi là phiên mã ngược. Thứ hai, PCR truyền thống cuội nguồn được sử dụng cho cDNA mới được tổng hợp để khuếch đại .RT PCR là một kỹ thuật có độ nhạy cao, yên cầu một lượng mẫu RNA tương đối nhỏ. RT PCR thường được sử dụng trong chẩn đoán và định lượng những loài RNA, đặc biệt quan trọng là virus RNA như virus suy giảm miễn dịch ở người và virus viêm gan C .

QPCR là gì?

PCR định lượng (QPCR) là một biến thể của PCR được sử dụng để đo định lượng các sản phẩm PCR. Nó còn được gọi là phản ứng chuỗi polymerase thời gian thực vì nó đo độ khuếch đại thời gian thực bằng máy PCR thời gian thực. Đây là một phương pháp phù hợp để xác định số lượng trình tự hoặc gen đích có trong mẫu. Tính năng thú vị của QPCR là nó kết hợp cả khuếch đại và định lượng thực vào một bước duy nhất. Do đó, sự cần thiết của điện di trên gel trong phát hiện có thể được loại bỏ bằng kỹ thuật QPCR. QPCR sử dụng thuốc nhuộm huỳnh quang để dán nhãn sản phẩm PCR trong quá trình phản ứng PCR mà cuối cùng dẫn đến định lượng trực tiếp. Khi các sản phẩm PCR tích lũy, các tín hiệu huỳnh quang cũng được tích lũy và nó sẽ được đo bằng máy thời gian thực. QPCR có thể được kết hợp với RT PCR. Nó được gọi là RT-QPCR hoặc QRT-PCR và được coi là một phương pháp định lượng, nhạy và mạnh nhất để phát hiện mức RNA trong tế bào hoặc mô.

SYBR Green và Taqman là hai giải pháp được sử dụng để phát hiện hoặc theo dõi quy trình khuếch đại của PCR thời hạn thực. Phương pháp SYBR Green được thực thi bằng cách sử dụng thuốc nhuộm huỳnh quang gọi là SYBR xanh và phát hiện sự khuếch đại bằng cách link thuốc nhuộm để tạo ra DNA sợi đôi. Taqman được triển khai bằng cách sử dụng những đầu dò có nhãn kép và phát hiện sự khuếch đại bằng cách suy thoái và khủng hoảng đầu dò bởi Taq polymerase và giải phóng fluorophore như trong hình 02. Cả hai chiêu thức đều theo dõi tiến trình của quy trình khuếch đại và báo cáo giải trình số lượng loại sản phẩm theo thời hạn thực .Real time PCR có nhiều ứng dụng khác nhau như định lượng bộc lộ gen, nghiên cứu và phân tích microRNA và RNA không mã hóa, định kiểu gen SNP, phát hiện những biến thể số bản sao, phát hiện những đột biến hiếm gặp, phát hiện sinh vật biến đổi gen, phát hiện những tác nhân lây nhiễm, v.v.

Sự khác biệt giữa RT PCR và QPCR là gì?

Tóm tắt – RT PCR so với QPCR

RT PCR và QPCR là hai phiên bản của PCR truyền thống. Kỹ thuật RT PCR được thực hiện cho các mẫu mRNA và nó được điều khiển bởi quá trình phiên mã ngược và sản xuất cDNA. QPCR được sử dụng để định lượng các sản phẩm PCR trong chu kỳ nhiệt PCR thời gian thực bằng cách sử dụng thuốc nhuộm huỳnh quang hoặc đầu dò được dán nhãn. Trong QPCR, lượng sản phẩm PCR được biểu thị bằng các tín hiệu huỳnh quang được phát ra bởi mẫu. RT PCR được sử dụng phổ biến như một quá trình khuếch đại trong khi QPCR thường được sử dụng như một quá trình định lượng. Đây là sự khác biệt giữa RT PCR và QPCR.

Người giới thiệu:
1. Deepak, SA, KR Kottapalli, R. Rakwal, G. Oros, KS Rangappa, H. Iwahashi, Y. Masuo và GK Agrawal. “PCR thời gian thực: Cách mạng hóa việc phát hiện và phân tích biểu hiện của gen.” Genomics hiện tại. Bentham Science Publishers Ltd., tháng 6 năm 2007. Web. 03/04/2017
2. Zeka, Fjoralba, Katrien Vanderheyden, Els De Smet, Claude A. Cuvelier, Pieter Mestdagh và Jo Vandesompele. “Phân tích biểu hiện gen dựa trên RT-qPCR đơn giản và nhạy cảm của các mẫu FFPE.” Tin tức thiên nhiên. Nhóm xuất bản thiên nhiên, ngày 22 tháng 2 năm 2016. Web. 03/04/2017
3. Overbergh, L., A. Giulietti, D. Valckx, B. Decallonne, R. Bouillon và C. Mathieu. “Việc sử dụng PCR phiên mã ngược thời gian thực để định lượng biểu hiện gen Cytokine.” Tạp chí Kỹ thuật Phân tử Sinh học: JBT. Hiệp hội các cơ sở tài nguyên phân tử sinh học, tháng 3 năm 2003. Web. 03/04/2017

Hình ảnh lịch sự:
1. “Taqman” của Người dùng: Braindamaged – Tác phẩm của người tải lên ban đầu (Miền công cộng) qua Commons Wikimedia
2. “Phản ứng chuỗi polymerase phiên mã ngược” của Jpark623 – Tác phẩm riêng (CC BY-SA 3.0) qua Commons Wikimedia

Source: https://laodongdongnai.vn
Category: Hỏi Đáp